免疫沉淀及免疫共沉淀 (Immunoprecipitation,IP及Co-IP)
栏目:IP&Co-IP 发布时间:2019-08-30

免疫沉淀及免疫共沉淀 (Immunoprecipitation,IP及Co-IP)

一、服务内容
1、温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度
2、样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育(进行WB验证可以免此步骤)
3、样品与IP抗体进行孵育,之后加入Protein A/G-Agarose进行孵育
4、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理
5、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定,质谱鉴定由客户自行确定
6、Western blot检测
(1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光
7、预实验及正式实验服务
二、样品要求(样品处理及保存见附件)
1. 细胞>1×107;组织>100mg;细菌湿重>1mg;植物>100mg;血清>50ul
2. 样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品

三、客户提供材料

1、新鲜或正确保存的样品
2、目的蛋白一抗,空白或者阴性同种属IgG
3、阳性对照样品(尽量提供)
4、相关文献(可选)
四、提交给客户结果
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告(可选)
五、服务说明
1、待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品
2、免疫沉淀用抗体
3、检测用抗体
4、特异性二抗
六、对照设置:由客户提供
1、空白:无抗体,只有protein A/G
2、阴性对照:无蛋白,有抗体及protein A/G
3、阴性对照:未转染细胞或者基因敲除样品
4、对应的无关空白抗体: Normal IgG
5、蛋白裂解液上清:Input