ChIP检测(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)
栏目:ChIP 发布时间:2019-08-30

ChIP检测(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)


第一部分:抗体IP验证

*免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)
服务内容
1. 温和条件下进行蛋白抽提,BCA定量,调整蛋白浓度
2. 样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育
3. 样品与IP抗体进行孵育
4. 洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理
5. 沉淀产物SDS-PAGE或者WB鉴定(目前暂不提供别的鉴定)
6. Western blot检测
(1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光,TotalLab Quant软件读取IOD值(可选)
样品要求(样品处理及保存见附件)
1. 细胞>1×107;组织>30mg;细菌湿重>50mg;植物>100mg;血清>50ul
2. 样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>500ug/样品

客户提供材料
1、 新鲜或正确保存的样品
2、 目的蛋白一抗
3、 阳性对照样品(尽量提供)
4、 相关文献(可选)
提交给客户结果
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取2个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告(可选)
5、抗体是否可以适用于IP是进行ChIP的前提

服务说明
1. 待检测样品可以是待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织等其他样品;
2. 免疫沉淀用抗体;
3. 检测用抗体;
4. 特异性二抗由天德悦(北京)生物科技有限责任公司提供;
5. IP检测可以不进行,但是不能保证后续实验的结果。

对照设置
1、 空白:无抗体,只有protein A/G
2、 阴性对照:无蛋白,有抗体及protein A/G
3、 阴性对照:未转染细胞或者基因敲除样品
4、 无关空白抗体
5、蛋白裂解液上清:Input

第二部分

*染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)
服务内容
1. 样品甲醛交联固定、终止、收集样品、裂解样品
2. 超声或者酶解处理样品DNA成片段,琼脂糖电泳检测
3. 样品预处理:用Protein A/G Sepharose孵育
4. 样品与IP抗体进行孵育
5. 洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex,并对免疫复合物进行变性处理,提取DNA样品
6. 检测
(1) 实时荧光定量PCR检测(最常用,免费检测)
(2) DNA芯片检测(需要联系测试厂家,需要另付费。询价)
(3) DNA产物测序(需要联系测试厂家,需要另付费。询价)