Western Blot检测
栏目:Western Blot检测 发布时间:2019-08-30

Western Blot检测 

一、服务内容

1、从动物细胞、人或动物组织、细菌、植物等样品中提取蛋白,重组蛋白、血清、培养上清等样品
2、对样品中蛋白进行半定量分析
3、Western blot检测

(1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光,TotalLab Quant软件读取IOD值(可选)
4、预实验及正式实验服务:帮助客户设计样品上样顺序以符合论文发表要求
5、免费进行蛋白内参检测(所有内参抗体均免费提供)

二、样品要求
1、细胞>1×107;组织>30mg;细菌湿重>1mg;植物>100mg;血清>50ul;等

2、样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品
三、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品(按照我们的要求提供)
2、目的蛋白一抗:我们可以给客户免费提供抗体查找服务
3、阳性对照样品(尽量提供)
4、相关文献(可选)

四、提交给客户结果
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),预实验采取3个一抗稀释度
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告(可选)
五、服务项目说明
客户要求加可曝光marker的,需事先说明,并按照可曝光项目收费
1、提供的蛋白量与目的待检测的蛋白数量有关,蛋白数量增加相应的样品量也要增加
2、胞浆、胞核蛋白抽提样品来源为:哺乳动物细胞、动物组织。如果1个样品分别提取胞浆、胞核蛋白后,蛋白定量时以2个样品计算
3、每张膜样品数量为1-8个,不足8个以8个收取。9-16个样品为2张膜,17-24个样品为3张膜;以此类推
    举例:7个样品,1个目的蛋白,算1张膜;有9个样品,1个目的蛋白,算2张膜
        7个样品,2个目的蛋白,算2张膜,有9个样品,2个目的蛋白,算4张膜
  以上为一般算法。如果客户样品数量需要按照组别等来进行上样时需要重新确定每张膜的上样量及膜的张数
4、选择部分样品进行预实验,参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验
5、向客户反馈预实验结果,等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验
6、请您提供质量保证的一抗(或委托我公司代购)。抗体的使用量通过预实验后进行确认,一般不回收使用一抗
7、如果需要对膜上目的蛋白进行抗体剥离(洗脱或者 stripping)的,请提前说明
8、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白、有阳性表达的细胞或组织、商品化的阳性对照产品等)作为阳性对照
9、免费内参检测为:beta-actin,beta-tubulin,GAPDH,Histone H3, Lamin B1等
10、如需进一步数据分析:TotalLab Quant专业软件读取IOD值、条带的Normalization处理、以及发表论文时所用条带的处理,请另询价
11、对条带结果有特殊要求,请另询价
12、双方签订合同后,收取70%首付后启动预实验
13、WB特殊要求请咨询


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